研究背景：

胰腺为人体内仅次于肝脏的第二大腺体，是内外分泌混合腺，包括两个主要系统：内分泌系统和外分泌系统，前者负责生产和分泌激素，后者约占胰腺的 90%，包括生产和分泌消化酶的细胞。胰腺腺泡细胞中高水平的核糖核酸酶和蛋白酶消化酶影响了mRNA的提取，限制了对胰腺疾病发病机制的深入理解。

研究现状：

目前对于正常胰腺组织消化方案的研究仍存在较多挑战，胰腺样本制备单细胞悬液的难度较大，常见的消化方案并不能获取到更加全面的细胞类型。例如，2021年一篇发表在Science上的文章通过其消化方案得到了相对全的细胞类型分群结果，但仍然存在部分缺失。

因此，烈冰结合以往项目经验，针对性地改良了小鼠正常胰腺单细胞悬液制备方案，优化组织解离条件，并采用烈冰自主研发的 Novelcyto 单细胞平台进行细胞捕获，获得了高质量数据分析结果及较全面的胰腺组织细胞类型。

实验流程——严谨专业、环环相扣：

首先将获取到的样本组织剪碎到1-2mm³，加入小鼠正常胰腺组织专用解离试剂，37℃水浴震荡进行组织消化；然后，及时终止消化反应，细胞悬液通过70μm滤网于50ml管中，离心去上清获得细胞沉淀；通过红细胞裂解液去除残留的成熟红细胞；随后，通过2-3轮的离心，清洗并回收高质量细胞；最后，对单细胞悬液进行质检，确定细胞活性、数量及背景情况。

将获取到单细胞悬液进行悬液质检，活性及细胞数均符合上机标准；使用烈冰自研NovelCyto平台进行细胞捕获，随后完成文库构建，上机测序。

实验所用单细胞捕获系统为烈冰自研单细胞平台——NovelCyto^TM v1.0（5888元/样），高质量、高效率、高性价比的单细胞测序新方案.

数据结果

通过CytoNavigator^TM单细胞数据分析系统进行数据分析，获得了高质量的数据结果及丰富全面的胰腺组织细胞类型，详细数据情况展示如下：

1、细胞质控结果

测序数据均达高质量水平，默认按UMI500条件筛选细胞。捕获细胞数为8139，Mean Reads per Cell约42K，符合单细胞数据分析标准；Fraction Reads in Cells达到了理想值80%左右；中位基因值：1,421、测序深度：42,138、中位数UMI、基因总值等关键参数的数据分析指标均表现出色。

2、数据标准化处理

在初始数据质控和表达量统计后，CytoNavigator^TM单细胞数据分析系统在分析过程还会对死细胞、双细胞、低质量细胞等多种可能存在的偏差因素进行数据标准化校正，力求获得准确无偏差的预处理后的单细胞基因表达数据。

筛选阈值：MT≤ 0.2、200 ≤ nFeature ≤10000

3、胰腺样本细胞类型鉴定

烈冰方案大类细胞群体分别鉴定出腺泡细胞、导管细胞、内分泌细胞、内皮细胞、淋巴内皮细胞、间皮细胞、星状细胞、周细胞、单核巨噬细胞和T细胞，同时也鉴定出了B细胞、中性粒细胞和施旺细胞的特征基因表达。细胞分群清晰，基于细胞聚类分析的结果，实现多种细胞的无偏捕获。

4、胰腺样本细胞类型占比统计

烈冰CytoNavigator单细胞数据分析系统

烈冰单细胞可视化平台

（烈冰生物还支持更多定制化深入分析，通过文末邮箱或电话联系我们获取更多信息吧）

优势总结

综上所述，烈冰改良消化方案对于疑难样本——小鼠正常胰腺组织单细胞悬液制备的效果优异，同时NovelCyto微孔法重力沉降单细胞捕获方案在中位基因数、UMI Counts数、mapping率等关键指标上均呈现高质量的结果，胰腺样本细胞类型丰富全面。搭配烈冰CytoNavigator^TM单细胞数据分析系统与高标准的细胞质量控制，准确反映出细胞的转录状态，产出高质量的实验结果！

烈冰制造

目前烈冰生物已自主研发多项仪器设备：

【烈冰智造】全流程国产化单细胞转录组解决方案将持续推动科学研究和精准医疗的发展。烈冰出品，必属精品，一站式精准服务，要做就做最懂你的单细胞平台！

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