【烈冰智造】自动化解离仪 VS 传统水浴震荡法

小鼠肺组织不同消化解离方式对比实验

本次测试应用【烈冰智造】自动化组织解离仪与传统水浴震荡法进行对比实验，对小鼠肺组织进行同步处理，以揭示两种技术在组织解离效果上的差异，探究两种解离方式在最终细胞类型上是否存在差异。

实验设计

物种：小鼠

组织：肺组织

分组：烈冰自动化解离 VS 传统水浴解离

实验目的：

本次实验以8周龄SPF级小鼠肺组织为测试对象，分别设置烈冰自动化解离实验组和传统水浴解离对照组，在相同解离配方的前提下，严格控制变量，确保两组实验环境的一致性，探究两种解离方式在最终细胞类型上是否存在差异。

实验流程

首先将获取到的小鼠肺组织剪碎到1-2mm³，加入解离试剂，分别应用烈冰自动化解离仪与37℃水浴震荡进行组织消化；然后，及时中止消化反应，细胞悬液通过70μm滤网于50ml管中，离心去上清获得细胞沉淀；通过红细胞裂解液去除残留的成熟红细胞；随后，通过2-3轮的离心，清洗并回收高质量细胞；最后，对单细胞悬液进行质检，确定细胞活性、数量及背景情况。

悬液质检

烈冰自动化解离细胞悬液最终质检结果：活性94.41%,获得细胞总数205W;传统水浴解离细胞悬液最终质检结果 ：活性97.1%,获得细胞总数172W。烈冰自动化解离可获得更多的细胞总数，同时维持了高质量的细胞活率。这一结果不仅验证了自动化解离仪在温和高效地消化组织方面的优异表现，也突显了其高样本回收率的优势。

烈冰生物单细胞捕获方案

使用烈冰自研Novelcyto平台进行细胞捕获，随后完成文库构建，上机测序。

细胞质控

在初始数据质控和表达量统计后，CytoNavigator^TM单细胞数据分析系统在分析过程中还会对死细胞、双细胞、低质量细胞等多种可能存在的偏差因素进行数据标准化校正，获得准确无偏差的预处理后的单细胞基因表达数据。（筛选阈值：MT＜0.2、200＜nFeature＜10000）

样本分布情况

未经去批次算法矫正，传统水浴解离和烈冰自动化解离处理的样本数据融合高度一致。

细胞类型鉴定

     无论是自动消化还是手动消化，都可以得到全面的细胞类型。根据特征marker基因表达，共鉴定出十四种细胞类型，包括T细胞_自然杀伤细胞、B细胞、浆细胞、单核细胞、巨噬细胞、肺泡巨噬细胞、树突状细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、上皮细胞、内皮细胞、成纤维细胞、平滑肌细胞和增殖细胞。

自动消化得到的细胞类型中，非免疫细胞的比例显著高于手动消化的结果。其中，非免疫细胞中的上皮细胞、内皮细胞及成纤维细胞得率显著提升，分别为传统的2倍、1.4倍、1.3倍。由此可以看出，烈冰自动化解离仪可以更为充分的解离实质组织及细胞。

结果总结

通过【烈冰智造】自动化组织解离仪与传统水浴震荡法同步对小鼠肺组织进行解离消化对比实验，从单细胞悬液质控、细胞质控以及获取不同细胞类型的数量等方面比较了两种解离方法的效果差异。烈冰自动化解离仪在单细胞悬液制备上展现出以下优势：

1、解离获得的单细胞悬液碎片、杂质更少

2、获取的单细胞悬液的细胞浓度更高，数量更多

3、对实质细胞解离效果更好