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Small RNA主要包括miRNA、piRNA、tsRNA（tRF&tiRNA）、snRNA和snoRNA等，是一类不具有蛋白编码能力的RNA分子，能调控基因表达，在细胞生长、发育和代谢等基础生物学过程中都扮演着重要的角色，甚至在癌症等相关疾病形成过程中也起着关键的作用。高通量测序技术省去了烦琐的Small RNA克隆文库构建过程，可以一次性生成上百万条Small RNA序列，能够快速鉴定特定条件下表达的已知Small RNA并发现新的Small RNA，同时还可以研究不同条件下Small RNA的表达差异，并可以联合转录组测序表达谱数据进行关联分析。
A workflow for Small RNA Sequencing
Jai PM et al., RNA Mapping, 2014
1. 针对动物（包括外泌体）Small RNA（miRNA、piRNA、tsRNA）提供定制化实验分析方案;
2. 不仅能高效准确发现并注释非模式物种新的miRNA，还能进行piRNA、tiRNA、tRF等最新的研究；
3. 及时更新miRBase、miRanda、RNAhybrid等专业miRNA数据库以及靶基因预测算法，保证分析结果紧跟行业前沿。
组织样品：
1. 动物组织：>200mg；
2. 植物组织：>200mg；
3. 细胞培养：>2x106个；
4. 全血：>3ml；
5. 菌体：>2x106个或>300mg。
RNA样品：
1. 请提供体积15 μL - 100 μL，总量≥10μg，浓度≥ 200ng/μL的RNA；
2. OD260/280介于1.8~2.2之间，OD260/230≥2.0，RIN≥6.5，28S:18S≥1.0，确保RNA无降解；
3. 送样时请标记清楚样品编号，管口使用Parafilm膜密封；
4. 样品保存期间切忌反复冻融；
5. 送样时请使用干冰运输。
不同样品之间存在差异，详情请向烈冰咨询
1. 总RNA提取及质控：RNA总量 > 1 μg ；RIN> 6.0
2. 小RNA富集：切胶范围10-50bp
3. 小RNA质控：Agilent 2200质控
4. 文库构建：文库分子18-30bp
5. 上机测序：Small RNA测序NovaSeq、HiSeq、Ion Proton等测序仪都可以完成。测序数据量40M reads。
>>动物小RNA
碱基质量结果图（过滤后）
注：横坐标表示碱基位点，纵坐标表示碱基质量值。
small RNA长度分布情况
注：左图为miRNA长度分布图；右图为piRNA长度分布图。
small RNA碱基偏好性分析
注：横坐标表示序列长度，纵坐标表示百分比，不同颜色表示不同的核苷酸。
miRNAs表达量统计分析
An X et al., Theriogenology, 2016
注：该表格列举了部分差异miRNAs的名称和序列信息，NE（normalized expression）表示标化后的miRNA表达量。
差异miRNAs热图
An J et al., Investigative Ophthalmology & Visual Science, 2015
注：横轴表示组别，纵轴表示不同miRNAs。
miRNA靶基因功能和pathway网络图
An J et al., Investigative Ophthalmology & Visual Science, 2015
注：该图表示miRNA-204靶向的基因，及其靶基因所显著富集的GO条目（右）和Pathway条目（左）。
novel miRNAs的茎环结构
An X et al, Theriogenology. 2016
注：该图展示了进一步分析与已知miRNA不匹配的测序reads预测的新的miRNA，这10个序列都具有显著的茎-环发夹二级结构。
miRNAs靶基因网络图
An J et al., Investigative Ophthalmology & Visual Science, 2015
注： 绿色表示下调的miRNAs，红色表示上调的miRNAs。
DCs分化过程中miRNAs表达情况
Su XP et al., Nature Communications, 2013
注：该图展示了DCs分化过程中miRNAs表达情况。H、I、M和R分别代表分化的四个阶段：H—HSCs；I—imDCs；M—maDCs；R—DCreg，左上角的数字代表将391个miRNAs分成了26个clusters，左下角的数字代表每个cluster中miRNAs的数量，有颜色的clusters代表miRNAs显著富集。
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